Рыбы

 

Аэромоноз рыб 

 

Аэромоноз (краснуха) – это бактериальная инфекция, поражающая многие виды пресноводных и аквариумных рыб. Заболевание прогрессирует с большой скоростью, передаётся от одной особи к другой через жабры и повреждения кожи. Поэтому важно вовремя определить болезнь и начать лечение, чтобы не допустить летального исхода и снизить количество возможных осложнений. 

Различают 3 вида течения аэромоноза: 

  • Острое (при температуре воды выше 25 ℃) — рыба держится у поверхности либо прибивается к берегу. Нарушается координация движений, на чешуе появляются красные участки, развиваются водянка и пучеглазие; 
  • Подострое (при температуре воды около 20 ℃) – края изъязвлений и плавники покрываются беловатым налетом. Заболевание продолжается до 60 суток и заканчивается гибелью. 
  • Хроническое (при температуре воды ниже 20 ℃) — язвы рубцуются, через 2–3 месяца рыбы выздоравливают. 

 

Диагноз ставится на основании эпизоотологических, клинических и патологоанатомических данных и результатов бактериологического исследования (выделения вирулентной культуры возбудителя, определение его серологической принадлежности, биопроба на здоровых рыбах и белых мышах). 

 

Болезнь трудноизлечима, поддается лечению только в начале заболевания. Рыб с брюшной водянкой, поднятыми чешуйками, пучеглазием — уничтожают, поскольку лечению они не поддаются. Внешне здоровую рыбу также следует обрабатывать специальным раствором. 

 

Профилактика 

 

  • Соблюдение охранно-ограничительных мер при перевозках и размещении рыб в хозяйствах; 
  • Завоз рыбы и икры осуществляют только из благополучных рыбхозов и водоемов; 
  • Тару и инвентарь для транспортировки рыб и икры дезинфицируют специальными препаратами; 
  • Соблюдение профилактического карантирования рыб; 
  • Ветеринарный контроль состояния здоровья рыб. 

 

  

 

Псевдомоноз рыб

 

 

 

Псевдомоноз рыб (плавниковая гниль) — инфекционное заболевание рыб, протекающее как геморрагическая септицемия при зимнем содержании рыбопосадочного материала второго порядка.  

Этой болезни подвержены сеголетки карпа, толстолобика пестрого и белого, серебряного карася, белые амуры, лососевые и аквариумные рыбы, буффало.  

Псевдомоноз способен нанести существенный экономический ущерб из-за многичисленной гибели рыб.  

Возбудителями заболевания является ряд специфических бактерий рода Pseudomonas. Оптимальный температурный режим для роста псевдомонад 20-25 ℃. Заболевание передается путем прямого контакта через воду, орудия лова, тару, спецодежду, при транспортировке рыб. Поврежденные кожные покровы и жабры становятся благоприятной почвой для заражения рыбы. 

Рыба становится вялой, слабо реагирует на раздражители из вне. Хаотично плавает у поверхности воды не «заглатывая воздух», на теле появляются ерошение чешуи, редко мелкие язвы. Брюшки буффало, карасей, карпов увеличиваются, при пробном проколе из него вытекает светло-желтая жидкость, наблюдается пучеглазие. Лососевые и аквариумные рыбы страдают от разволокнения плавников, если заболевание прогрессирует, появляются язвы и асцит. У толстолобиков отмечено кровоизлияние на жаберных крышках, у основания плавников, боковых стенках, жабры анемичные, имеют серо-белый цвет. 

Диагноз ставится на основании бактериологических исследований.  

Специфических методов лечения псевдомоноза нет.  

 

При подтверждении диагноза на рыбоводное хозяйство: 

  • накладывается ограничение на перевозку рыбы в другие рыбхозы; 
  • проводятся ветеринарно-санитарные мероприятия; 
  • проводится лечебно-профилактическая обработка рыб. 

Рыбоводное хозяйство признается благополучным по псевдомонозу спустя 3 года после последнего зафиксированного случая проявления заболевания, а также при отрицательных результатах бактериологических исследований. 

Профилактика 

  • Систематическая очистка и текущая дезинфекция рыбоводных емкостей; 
  • Предотвращение повреждения рыб, а также попадание в водоем рыбы не прошедшей карантин.  

 

 

 

Паразитарные болезни рыб

 

 

 

Трематоды. 

Трематодозы у рыб вызывают плоские черви, относящиеся к классу сосальщиков Trematoda. Для них характерно плоское листовидное тело длиной от нескольких миллиметров до нескольких сантиметров.  

 Тело трематод покрыто кутикулой, под которой расположен кожно-мускульный мешок. Пространство, ограниченное кожно-мускульным мешком, заполнено паренхимой, в которой располагаются внутренние органы. Прикрепительные образования представлены различными присосками, строение и количество которых у разных представителей может варьировать. У сосальщиков, обитающих в кровяном русле присоски отсутствуют. 

Трематоды — паразиты со сложным циклом. Для своего развития они требуют, как правило, одного или двух промежуточных хозяев. 

Взрослые сосальщики (мариты) паразитируют в кишечнике позвоночных животных (рыбы, птицы, млекопитающие). Первым промежуточным хозяином являются моллюски, вторым — рыбы, амфибии и водные беспозвоночные. В некоторых случаях второй промежуточный хозяин может отсутствовать. 

У рыб, как правило, трематодозы вызываются личинками сосальщиков на стадии метацеркарий и церкарий. Исключение представляет своеобразная трематода Sanguinicola, паразитирующая в кровеносной системе рыб. В тех случаях, когда окончательным хозяином трематод являются хищные рыбы, мариты паразитируют у них в кишечнике. 

Цикл развития трематод, вызывающих заболевания рыб в пресных водоемах, чаще происходит по следующей схеме. Взрослые паразиты обитают в кишечнике различных рыбоядных птиц (чаек, Крачек, цапель и др.). Яйца гельминтов вместе с испражнениями птиц попадают в воду, где из них вылупляются личинки — мирацидии, тело которых покрыто ресничками. Мирацидии плавают в воде и проникают в первого промежуточного хозяина — моллюска. В моллюске мирацидий локализуется в печени или половой железе. Здесь личинка сбрасывает ресничный покров и превращается в бесформенный неподвижный мешок — спороцисту. Спороциста растет и внутри нее из особых клеток (зародышевых шаров) путем партеногенеза образуется следующая стадия развития — редии. Они отличаются от спороцисты подвижностью и присутствием короткого мешковидного кишечника. 

После образования редий спороциста лопается, вышедшие из нее редии остаются в теле моллюска. Далее в теле редий начинают образовываться личинки следующего поколения — церкарии. Они похожи на взрослого червя и отличаются от него только наличием мускулистого хвоста и отсутствием половых органов. Через специальное отверстие церкарии выходят из редий, а затем покидают и моллюсков. Плавающие в воде с помощью мускулистого хвоста церкарии должны проникнуть в рыбу, при этом они отбрасывают хвост и превращаются в следующую личиночную стадию — метацеркарий. Метацеркарии отличаются от взрослых гельминтов только отсутствием развитых половых органов и локализуются в мускулатуре, глазах, различных внутренних органах рыбы. 

Рыбоядные птицы заражаются паразитами после переваривания инвазированной рыбы. В кишечнике птиц метацеркарии продолжают развиваться, становятся половозрелыми гельминтами (маритами), которые продуцируют яйца и весь цикл начинается снова. 

Приведенная здесь схема цикла у разных видов трематод может иметь свои особенности. 

Диагноз  ставят на основании клинических признаков и при обнаружении большого числа возбудителей или их яиц в кровеносных сосудах жабр и почек больных рыб.  

 

Нематоды. 

Возбудители нематодозов рыб — гельминты — относятся к типу Nemathelminthes, классу Нематод (Nematoda), или круглых червей. Их отличает наличие первичной полости тела, в которой располагаются внутренние органы.   

Тело нематод, как правило, удлиненное, нитевидной или веретеновидной формы, редко мешковидное или шаровидное, обычно округлое в поперечнике. Длина тела чаще от нескольких миллиметров до нескольких десятков миллиметров. Оно покрыто плотной эластичной кутикулой, которая может иметь исчерченность и образовывать шипы, валики, бугорки и другие структуры. На головном конце нематод расположено ротовое отверстие, часто окруженное губами, сосочками. 

Пищеварительная система начинается ротовой полостью, иногда окруженной ротовой капсулой. Далее следуют глотка, пищевод, обычно состоящий из двух отделов — мышечного и железистого, называемого желудочком, и кишечник. 

Нематоды обычно раздельнополы. Самцы часто мельче самок. 

Жизненные циклы отличаются большим разнообразием. Рыбы могут служить для них как окончательными, так и промежуточными хозяевами. Промежуточными хозяевами для нематод рыб часто служат различные кормовые беспозвоночные. 

Половозрелые нематоды чаще локализуются в кишечнике рыб, личиночные стадии под чешуей, в мускулатуре и в различных внутренних органах. 

Диагноз  ставят на основании клинических признаков и результатов паразитологического обследования. 

Меры борьбы не разработаны. Необходим тщательный контроль за завозом рыб в новые водоемы с целью акклиматизации. При выращивании в рыбоводных хозяйствах и кормлении бокоплавами следует использовать рачков только из благополучных водоемов. 

 

Цестоды. 

Представители класса ленточных червей Cestoidea, называются цестодозами. Класс ленточных червей включает в себя 9 отрядов, из которых в костистых пресноводных рыбах на взрослой фазе встречаются представители четырех отрядов: Caryophyllidea, Pseudophyllidea, Proteocephalidea и Nippotaeniidea. Представители четырех других отрядов (Trypanorhyncha, Diphyllidea, Tetraphyllidea и Lecanicephalidea) во взрослом состоянии паразитируют в акулах и скатах, а в костистых морских и проходных рыбах встречаются только их личинки — плероцеркоиды. Девятый отряд — Cyclophyllidea — объединяет высших цестод—паразитов теплокровных животных, у которых личиночные формы отдельных видов могут развиваться в различных внутренних органах пресноводных рыб. Среди ленточных червей далеко не все виды вызывают заболевания рыб. Однако есть виды весьма патогенные, вызывающие значительные эпизоотии, сопровождающиеся гибелью рыбы. 

Тело ленточных червей молочно-белого цвета, плоское, лентовидное, состоит из головки (сколекса) и множества члеников (проглоттид), составляющих стробилу. Число члеников может достигать сотен и даже тысяч. У некоторых представителей этого класса, в частности отряда Caryophyllidea, тело не имеет члеников и выглядит как сплошная лента. Длина тела некоторых цестод может достигать 10—15 м. Половозрелые ленточные черви чаще всего паразитируют в кишечнике, личиночные стадии (плероцеркоиды) — в полости тела и других органах и тканях рыб. Сколекс цестод служит для прикрепления и потому снабжен различными органами, приспособленными для этого: ботриями, ботридиями, присосками, хоботками. Прикрепительные органы надежно удерживают гельминта в кишечнике.  

Питание червей происходит путем всасывания всей поверхностью тела через кутикулу, на которой имеются микроскопические микротрихии, имеющие сложное строение, отличное от микроворсинок других плоских червей. 

Половая система у расчлененных цестод самостоятельная в каждом членике, у нерасчлененных цестод имеется всего один половой комплекс. Все цестоды рыб — гермафродиты. 

Вспышки заболевания в прудовых хозяйствах отмечаются чаще всего в мае—июне, когда зараженность двухлетков карпа достигает 40 % (к середине мая), а в июне — 80 %. К концу августа зараженность обычно снижается до 20—30 %, уменьшается и интенсивность поражения. 

Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, клинического и паразитологического анализа, при котором определяются видовая принадлежность и численность гельминта. 

Меры борьбы. На неблагополучное хозяйство накладывают ограничения и проводят комплекс ветеринарно-санитарных мероприятий. Пруды, в которых содержалась инвазированная рыба, тщательно просушивают весной перед зарыблением и осенью после отлова рыбы. Зимой пруды промораживают с дезинфицирующей обработкой ложа негашеной или хлорной известью. Проводят поочередное летование прудов с перепахиванием ложа и посевом трав. 

 

Скребни. 

У рыб паразитируют представители двух классов (Eoacanthocephala и Palacanthocephala). 

Скребни чаще встречаются у пресноводных, реже у морских рыб. Некоторые из них вызывают патологические изменения стенки кишечника, сопровождающиеся гибелью рыбы. 

Тело скребней обычно белого, коричневого или оранжево-красного цвета, удлиненное, иногда несколько уплощенное, чаще цилиндрическое, сужающееся к заднему концу. На переднем конце тела находится цилиндрический, реже сферический втяжной хоботок, вооруженный различной формы крючьями. Хитинизированные крючья хоботка могут быть расположены спиральными рядами или в шахматном порядке, при этом хорошо видны спиральные и продольные ряды. Хоботок является основным органом прикрепления паразита к стенке кишечника хозяина. Основание хоботка никогда не покрыто крючьями и называется шейкой. 

Хоботок при помощи особых мышц втягивается в полость хоботкового влагалища, которое представляет собой цилиндрический мускулистый мешок, спускающийся в шейку и тело. Возле шейки начинаются парные органы — лемниски, лежащие по бокам хоботкового влагалища. Предполагают, что лемниски способствуют втягиванию и вытягиванию хоботка. Тело покрыто кутикулой и представляет собой мешковидное образование, в полости которого заключены внутренние органы. На поверхности тела расположены шипы, чаще в передней части. Кожно-мускульный мешок состоит из кольцевых и продольных слоев мышц. Нервная система представлена центральным ганглием, лежащим внутри хоботкового влагалища, и отходящими от него к хоботку двумя стволами и парными боковыми задними нервами. Пищеварительная система отсутствует, питание осуществляется осмотическим путем. Выделительная система представлена мерцательными клетками, отходящими от них каналами, впадающими в общий проток.  

Скребни раздельнополые. Самцы обычно мельче самок. 

В цикле развития скребней нет свободноживущей фазы во внешней среде. Развитие скребней проходит при участии промежуточных хозяев, как правило, ракообразных: бокоплавов, водяных осликов, ракушковых рачков. Промежуточный хозяин заглатывает яйцо. В кишечнике рачка из яйца выходит личинка, называемая акантором. Акантор проходит через стенку кишечника рачка в полость его тела и окружается оболочкой. Здесь он развивается дальше, образуется акантелла, напоминающая взрослого червя с втянутым хоботком и недоразвитыми половыми органами. Рыбы заражаются при поедании зараженных акантеллами рачков. Рыба может быть окончательным и резервуарным хозяином скребней. Если рыба заглотит несвойственный ей вид скребня, например, из рода Corynosoma — паразита морских млекопитающих, то такие личинки переходят из кишечника в полость тела, затем в мышцы и другие органы, где инцистируются. Для коринозом рыба является резервуарным хозяином. Они могут скапливаться в мышцах рыб в огромном количестве (до 100 экз. и более) и значительно ухудшать качество рыбной продукции.      Мясо рыбы, пораженное коринозомами, необходимо подвергать термальной обработке даже при скармливании пушным зверям. 

Половозрелые скребни локализуются в кишечнике и пилорических придатках рыб и причиняют им значительный ущерб. Глубоко вонзаясь хоботком в стенку кишечника, скребни вызывают его воспаление, проникая иногда и в полость тела. Деформация стенки, геморрагии, острая анемия являются обычно последствием заражения рыб скребнями. 

Диагноз  ставят на основании патологоанатомического вскрытия, обнаружения гельминтов и установления их видовой принадлежности. 

 

 

 

 

П Р Е Д И С Л О В И Е 

В деле выполнения решении партии и правительства по дальнейшему развитию животноводства, а также задач, поставленных Продовольственной программой страны, ветеринарной службе большую помощь оказывают ветеринарные лаборатории. Лаборатории осуществляют диагностику инфекционных и паразитарных болезней животных, выявляют нарушения обмена веществ в их организме, проводят исследования, направленные на предупреждение отравлений, помогая тем самым специалистам совхозов, колхозов и других хозяйств успешно осуществлять лечебно-профилактические мероприятия. От того, насколько своевременно ставится диагноз, разработаны и рекомендованы профилактические и лечебные меры, зависит успех ликвидации болезней, сохранность поголовья животных и повышение их продуктивности. 

Последнее время в лабораториях появилось много приборов и приспособлений, облегчающих труд специалистов и позволяющих проводить исследования на более современном и качественном уровне, с большой достоверностью. В связи с этим многие ранее действовавшие методические указания переработаны. 

Кроме того, ежегодно для лабораторной практики предлагаются новые методы диагностики. В отечественной и зарубежной литературе постоянно публикуется большое количество материалов о новых методах исследований, предлагаются различные модификации существующих методик, вводятся дополнительные диагностические тесты. 

Ветеринарные лаборатории в своей работе не могут использовать всего многообразия имеющихся в литературе методов исследования или из-за того, что они недостаточно апробированы, или из-за сложности применяемого оборудования. Иногда методы, предлагаемые различными авторами, при определении одних и тех же показателей дают несовпадающие результаты. 

В связи с этим в справочник включены методы лабораторных исследований патологического материала, получаемого от больных, убитых или павших сельскохозяйственных животных, апробированные Центральной ветеринарной лабораторией и утвержденные Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР. 

Книга содержит методические указания по диагностике инфекционных болезней бактериальной этиологии, а также методические указания по применению культур клеток в диагностических исследованиях. 

Методики изложены по единой схеме: взятие и пересылка патологического материала, методы его обработки и обогащения; бактериоскопические исследования, включая световую и люминесцентную микроскопию; выделение культур возбудителей инфекционных болезней на питательных средах; заражение лабораторных животных как с целью выделения чистой культуры возбудителя, так и определения степени ее патогенности; гистологические исследования; идентификация и дифференциация возбудителей с использованием различных методов; серологические исследования для определения вида возбудителя. 

Приведенные в справочнике методы лабораторных исследований унифицированы и стандартизированы. В широком смысле слова унификация и стандартизация подразумевают применение для различных исследований одних и тех же аппаратов, приборов, инструментов, по суды, реактивов, исключая, конечно, специальные методы исследования; применение стандартных (унифицированных) питательных сред и диагноста кумов; разработку методических указаний по единой форме. 

Все это позволяет лабораторным работникам с меньшей затратой сил и средств, на высоком методическом и техническом уровне, качественно и в срок проводить диагностические исследования. Таким образом, стандартизация методов исследования явится способом наведения строгого порядка в работе ветеринарных лабораторий. 

Книга предназначена для ветеринарных врачей, фельдшеров, а также лаборантов ветеринарных диагностических лабораторий. 

В справочник не вошли материалы по диагностике туберкулеза, так как они пересматриваются и дополняются, поэтому их публикация будет осуществлена в последующих изданиях. 

 

 

 

Наставление по применению кампилобактериозных (вибриозных) люминесцирующих сывороток при лабораторной диагностике кампилобактериоза (вибриоза) животных 
(Утверждено Главным управлением ветеринарии Минсельхоза СССР 15 мая 1980 г.)
1.Сведения о сыворотках и подготовка к работе.

1.1. Кампилобактериозные * (вибриозные) люминесцирующие сыворотки представляют собой жидкие или высушенные лиофильным способом глобулиновые фракции соответствующих агглютинирующих сывороток, к которым химическим путем присоединен флуорохром-флуоресцеикизотиоцианат. 

1.2. Кампилобактериозные люминесцирующие сыворотки предназначены для обнаружения и идентификации возбудителей кампилобактериоза (вибриоза) крупного рогатого скота и овец в чистых и смешанных культурах, патологическом и клиническом материалах. 

1.3. Биологической промышленностью выпускаются для указанной цели две люминесцирующие сыворотки: 

1) бивалентная — для обнаружения и идентификации бактерий 

Campylobacter fetus subspecies fetus 1 серовара и Campylobacter fetus subspecies intestinalis 2 серовара; 

2) моновалентная — для выявления бактерий Campylobacter sputorum subspecies bubulus. 

1.4. Сухие сыворотки выпускаются в ампулах, содержащих пористую массу желто-оранжевого цвета, легко растворимую в воде; жидкие — во флаконах. Это прозрачная жидкость желто-оранжевого цвета с зеленой флуоресценцией. 

На этикетке ампулы (флакона) должно быть указано: наименование предприятия-изготовителя, наименование сыворотки, ее объем, номер серии и госконтроля, рабочее разведение и дата изготовления. 

1.5. Срок годности лиофилизированных сывороток— 1 год, жидких — 6 мес при условии хранения их в темном месте при температуре 2—4 С. 

Сыворотки с истекшим сроком годности можно применять после предварительного установления красящего титра, если они сохранили специфичность и вызывают свечение гомологичных культур на четыре креста в титре не ниже половины разведения, указанного на этикетке. 

1.6. Для проведения исследований необходимо иметь: 

люминесцирующие сыворотки, указанные в подпункте 1.3; нефлуоресцирующее иммерсионное масло или его заменитель, состоящий из диметилфталата—*100 мл и нафталина сублимированного — 1,75 г или тимола чистого — 5 г; глицерин с фосфатным буфером pH 8,0 (9 частей глицерина нейтрального и 1 часть фосфатного буфера, pH 8,0); физиологический раствор хлорида натрия с фосфатным буфером pH 7,4 (см. подпункт 1.7) 

 

—————————- 

* Названия болезни «кампилобактериоз» и вида ее возбудителей «кампилобактер» приняты по существующей международной классификации. 

спирт этиловый; 

Люминесцентный микроскоп; 

покровные стекла толщиной не более 0,2 мм; 

предметные стекла нелюминесцирующие и хорошо обезжиренные. 

1.7. Физиологический раствор с фосфатным буфером готовят следующим образом: на аналитических весах отвешивают 9,078 г химически чистого однозамещенного фосфата калия (КН2РО4), помещают в мерную колбу на 1 л, растворяют в дистиллированной воде и доводят объем до метки; затем отвешивают 11,876 г двузамещенного фосфата натрия (Na2HPО4·2H2О), переносят в другую мерную колбу на 1 л и поступают так же, как с фосфатом калия. 

При использовании двузамещенного фосфата натрия, содержащего 12 молекул воды (Na2HPО4·12Н2О), для получения 1л раствора берут навеску 23,752 г, а безводного препарата 

(Na2HPО4) — 9,476 г. Для получения буфера pH 7,4 смешивают 4 части раствора двузамещенного фосфата натрия и 1 часть раствора однозамещенного фосфата калия. Если при смешивании растворов в соотношении 4:1 не получают нужный pH, то, изменяя это соотношение, достигают необходимой величины pH (при кислотном pH добавляют раствор двузамещенного фосфата натрия, при щелочном — раствор однозамещенного фосфата калия). 

Полученный буфер добавляют к физиологическому раствору (8,750 г хлорида натрия на 1 л дистиллированной воды) в соотношении 1 : 50 Если при этом физиологический раствор будет иметь pH ниже 7,4, то увеличением количества добавляемого буфера добиваются нужной реакции физиологического раствора. 

1.8. Для работы сухую сыворотку в ампуле растворяют с соблюдением стерильности дистиллированной водой до указанного на этикетке объема сыворотки. Содержимое ампулы переносят в стерильную пробирку и хранят под резиновой пробкой при температуре 2—4°С не более 14 сут. 

1.9. Для получения рабочего разведения растворенную сухую или жидкую сыворотку разводят забуференным физиологическим раствором хлорида натрия pH 7,4 до разведения, указанного на этикетке (рабочее разведение сыворотки готовить впрок не рекомендуется). 

2 Обнаружение возбудителя кампилобактериоза (вибриоза) в культуре. 

2.1. Для исследования пригодны чистые и смешанные культуры, выращенные на общепринятых питательных средах. Из культуры готовят 2 мазка средней густоты (несколько десятков бактерий в поле зрения микроскопа) на разных стеклах. Мазки делают ближе к узкому краю стекла площадью не более 1 см2. При значительном загрязнении культур делают по 2 мазка для каждой сыворотки. 

Место нанесения культуры очерчивают карандашом по стеклу с обратной его стороны, мазки маркируют и подсушивают на воздухе. 

2.2. Мазки фиксируют этиловым спиртом в течение 15 мин, для чего их погружают в вертикальном положении в стеклянный сосуд со спиртом. Каждое стекло отделяют металлической проволокой или стеклянной соломкой. После фиксации и испарения спирта мазки ополаскивают физиологическим раствором хлорида натрия с фосфатным буфером pH 7,4 и подсушивают на воздухе. 

2.3. Подсушенные зафиксированные мазки помещают в чашки Петри или кюветы на увлажненную фильтровальную бумагу, наносят на один мазок 2—3 капли бивалентной сыворотки кампилобактер фетус в рабочем разведении, на второй — сыворотки кампилобактер подвида бубулюс и распределяют сыворотки по всей поверхности мазка. Чашки Петри закрывают крышкой, кюветы — стеклом и помещают в термостат при температуре 37°С на 30 мин. 

Затем сыворотку с мазков удаляют, мазки погружают в физиологический раствор pH 7,4 на 20 мин и промывают, периодически встряхивая и меняя раствор через 10 мин. Отмытые от сыворотки мазки ополаскивают дистиллированной водой и высушивают на воздухе. 

2.4. Перед просмотром мазка на его поверхность наносят небольшую каплю глицерина с буфером pH 8,0, накрывают покровным стеклом, слегка притирают, излишек глицерина удаляют. На покровное стекло наносят нефлуоресцирующее иммерсионное масло или его заменитель и проводят люминесцентную микроскопию, используя светофильтры СЗС-7, СЗС-14, БС-8, ФС-1, ФС-2, окулярные — Т-1Н, Т-2Н^ ЖС-18, № 1, № 2, увеличение 5(7)Х90, сила тока 4,1—4,5 А. 

2.5. При микроскопии учитывают, что окрашенные люминесцирующей сывороткой кампилобактерии светятся ярким зеленоватым светом более интенсивно по периферии (ободок). Это свечение оценивают по следующей системе: 

(Н—f—|—f-) — яркая, сверкающая зеленая люминесценция морфологически типичных микробов с более интенсивным свечением по их периферии (положительная); 

( + + + ) — отчетливо выраженная, достаточно яркая зеленоватая люминесценция морфологически типичных микробов с более интенсивным свечением по их периферии (положительная); 

— недостаточно яркая желтовато-зеленоватая люминесценция, периферический ободок выявляется с трудом (сомнительная); 

(+ ) — люминесценция очень слабая, морфология микробов различается с трудом (отрицательная); 

(—) — люминесценция отсутствует, видны лишь тени микробов (отрицательная). 

2.6. Видовую принадлежность обнаруженного возбудителя устанавливают по известной сыворотке, вызывающей специфическое свечение морфологически типичных для кампилобактерий микробных клеток с интенсивностью не менее чем на три креста.

При обнаружении свечения микробных клеток в мазках, обработанных люминесцирующей бивалентной сывороткой кампилобактер фетус и отсутствии свечения в мазках, обработанных люминесцирующей сывороткой кампилобактер подвида бубулюс, делают заключение о принадлежности культуры к кампилобактер фетус. 

При обнаружении свечения микробных клеток в мазках, обработанных сывороткой кампилобактер подвида бубулюс, дают заключение о принадлежности культуры к этому виду. Если будут обнаружены светящиеся микробные клетки типичной морфологии в мазках, обработанных обеими сыворотками, делают заключение о наличии смешанной культуры. 

3 Обнаружение возбудителя кампилобактериоза (вибриоза) в патологическом и клиническом материале

3.1. Для люминесцентной микроскопии спермы, слизи или содержимого желудка абортированного плода одновременно с посевами делают по два мазка для каждой сыворотки. 

Пробы слизи из препуция и шейки матки предварительно подготавливают; тампон, которым брали слизь, отжимают в физиологическом растворе и удаляют, смыв с тампона переносят в центрифужную пробирку и центрифугируют 15 мин при 4—5 тыс. об/мин; мазки делают из осадка, по два для каждой сыворотки. 

3.2. Дальнейшую обработку мазков и учет результатов проводят, как указано в пп. 2.2—2.6. 

3.3. Для гашения неспецифического свечения фона препарата при исследовании патологического или клинического материала можно применять бычий альбумин, меченный родамином в смеси с диагностической люминесцирующей сывороткой в соответствии с наставлением по его применению (бычий альбумин, меченный родамином, выпускает Всесоюзный институт эпидемиологии и микробиологии имени Н. Ф. Гамалеи АМН СССР, 123098, Москва, Д-98, ул. Гамалеи, 18). 

4 Оценка результатов. 

4.1. При обнаружении в мазках из культуры или материала, обработанных люминесцирующей бивалентной сывороткой кампилобактер фетус, свечения морфологически типичных для кампилобактерий микробных клеток ставят положительный люминесцентный диагноз, который расценивается как сигнальный и служит основанием для проведения в хозяйстве мероприятий против кампилобактериоза (вибриоза) до получения результатов бактериологического исследования. 

4.1.1. При получении положительного результата люминесцентной микроскопии исходного Материала проводят бактериологическое исследование с целью выделения культуры кампилобактерий и последующей идентификации ее по культурально-биохимическим свойствам. 

4.1.2. При положительном результате люминесцентной микроскопии культуры подвид определяют общепринятыми бактериологическими методами. 

4.2. При сомнительном (слабое свечение на два креста, свечение кампилобактерий атипичной формы) и отрицательном результатах люминесцентной микроскопии исходного материала проводят бактериологическое исследование с люминесцентной микроскопией культур (при сомнительном результате люминесцентная микроскопия культур обязательна). 

4.3. При сомнительном результате люминесцентной микроскопии культур диагноз ставят на основании идентификации культур общепринятыми методами. 

4.4. Отрицательный результат люминесцентной микроскопии культуры кампилобактерий указывает, что данная культура не относится к возбудителю кампилобактериоза (вибриоза) крупного рогатого скота и овец.